• facebook
  • njikọ
  • youtube

Nyochaa arụmọrụ nke primers na nyocha na mmalite nke PCR reagents na ikpebi ọnọdụ mmeghachi omume kachasị mma bụ ihe ndị a chọrọ iji hụ na ọganihu dị mma nke nnwale nkịtị.

Yabụ kedu ka anyị ga-esi kwenye nyocha primer na mbido mbụ?

Ihe ndị bụ isi na-egosi bụ ntọala, mgbaka nkwalite, uru ct, arụmọrụ nkwalite, nchọpụta nlele dị ala, CV, wdg.

Ntọala

Ndabere bụ ahịrị kwụ ọtọ n'ime usoro nkwalite PCR.N'ime okirikiri ole na ole mbụ nke mmeghachi omume mmụba PCR, mgbama fluorescence anaghị agbanwe nke ukwuu wee mepụta ahịrị kwụ ọtọ.Ahịrị kwụ ọtọ a bụ ntọala.

Mgbe ị na-enyocha PCR primer probes, ṅaa ntị ma ọ bụrụ na akara ala dị larịị.Ịdị ọcha nke ntinye nyocha nke primer ga-emetụta ntọala ntọala, dị ka ime ka ntọala na-ebili ma ọ bụ daa.Ihe mgbakwasị ụkwụ bụkwa ihe nrịbama nwere nghọta.
Nyocha

Ọkpụkpọ Amplification

Ihe ngosi ọzọ nwere nghọta bụ udi nke nkwudo nkwalite.Ọ kacha mma ịnwe akụkụ nke S ka ịzenarị mmụba nke abụọ ma ọ bụ akụkụ nkwalite ndị ọzọ na-adịghị mma.
efu

Ct Uru

Ọnụ ọgụgụ nke cycles kwekọrọ na ntụgharị ntụgharị site na ntọala ruo n'ọba ụba bụ uru Ct.

Maka otu ihe atụ ahụ, ihe nyocha primer dị iche iche na-ebute ụzọ mgbago dị iche iche, yana uru Ct kwekọrọ ga-emetụta arụmọrụ nkwalite na ogo nnyonye anya.Na tiori, ntakịrị uru Ct nke nyocha primer anyị na-ahọrọ, ka mma.

Nyocha-3

Ịmụba arụmọrụ

Otu n'ime ụzọ ndị a pụrụ ịdabere na ya na nke kwụsiri ike maka ịlele arụmọrụ nkwalite PCR bụ ọkọlọtọ ọkọlọtọ, nke ndị nyocha na-amatakwa nke ọma.Usoro a gụnyere ime usoro nlele iji chịkwaa ọnụọgụ nke ndebiri ebumnuche.A na-emekarị ihe nlele ndị a site n'ụdị dilutions nke ngwọta ngwaahịa agbadoro, nke a na-ejikarị bụ dilution okpukpu 10.Iji usoro nke diluted samples, na-eji ọkọlọtọ qPCR omume na-amụba iji nweta Cq uru, na n'ikpeazụ see a ọkọlọtọ usoro dị ka ịta nke ọ bụla sample na kwekọrọ Cq uru iji nweta linear equation Cq = -klgX0 + b, na nkwalite arụmọrụ E = 10 (-1 / k) -1.Mgbe ị na-eji qPCR maka nyocha ọnụọgụ ọnụọgụgụ, a na-achọ ịrụ ọrụ nkwuputa ka ọ dị na nso nke 90% -110% (3.6> k> 3.1).

Nyocha-4

Nchọpụta ihe nlele dị ala

Mgbe nlele nlele dị ala, ọnụọgụ nchọpụta nke ihe nyocha primer dị iche iche.Anyị na-ahọrọ ihe nlele 20 dị ala iji megharịa, na usoro nyocha nke primer nke nwere ọnụ ọgụgụ kachasị elu kachasị mma.

Nyocha-5

Ọnụọgụ nke mgbanwe (CV)

Enwere ike ịchọta nlele 10 oyiri site na nyocha primer dị iche iche dịka akara ahịrị nke reagent maka nchọpụta mmụba nucleic acid.

Nyocha-6

Ọnụ ọgụgụ Reagents:
izi ezi
Izi ezi n'ime otu batch kwesịrị izute: ọnụọgụ nke mgbanwe (CV,%) nke uru logarithmic nke ntinye ule bụ ≤5%.Mgbe ihe nlele nlele ahụ dị ala, ọnụọgụ nke mgbanwe (CV,%) nke logarithm nke nchọta nchọpụta bụ ≤10%


Reagents dị mma:
izi ezi
Izi ezi n'ime otu ogbe kwesịrị izute:

(1) Ọnụọgụ nke mgbanwe nke uru Ct (CV,%) ≤5%

A na-anwale otu ihe nlele ahụ n'otu oge maka oge 10, na nsonaazụ ule kwesịrị ịdị na-agbanwe agbanwe


Oge nzipu: Sep-18-2021