Ọnwụ ntị (HL) bụ ọrịa nkwarụ anụ ahụ na-ahụkarị na ụmụ mmadụ.Na mba ndị mepere emepe, ihe dị ka pasent 80 nke ndị ntị chiri tupu ha asụ asụsụ ụmụaka bụ ihe mkpụrụ ndụ ihe nketa kpatara.Ihe na-emekarị bụ ntụpọ otu mkpụrụ ndụ ihe nketa (dị ka egosiri na Fig 1), achọpụtala mmụgharị mkpụrụ ndụ 124 na-ejikọta ya na nkwụsị ntị na-enweghị syndromic na ụmụ mmadụ, ihe ndị ọzọ kpatara ya site na gburugburu ebe obibi.Ihe ntinye nke cochlear (ngwaọrụ eletrọnịkị etinyere na ntị nke ime nke na-enye ọkụ eletrik ozugbo na akwara anụ ahụ) bụ nhọrọ kachasị dị irè maka ịgwọ HL siri ike, ebe ihe enyemaka ntị (ngwa eletrọnịkị mpụga nke na-agbanwe ma na-eme ka ụda ụda dị elu) nwere ike inyere ndị ọrịa aka na HL na-agafeghị oke.Agbanyeghị, ọ nweghị ọgwụ dị ugbu a iji gwọọ HL (GHL) eketa.N'ime afọ ndị na-adịbeghị anya, ọgwụgwọ mkpụrụ ndụ ihe nketa enwetara nlebara anya na-abawanye ụba dị ka ụzọ na-ekwe nkwa ịgwọ ọrịa ntị nke dị n'ime.

Fig1.Nkesa ụdị mgbanwe metụtara ntị chiri.[1]

N'oge na-adịbeghị anya, ndị ọkà mmụta sayensị sitere na Salk Institute na Mahadum Sheffield bipụtara nsonaazụ nyocha na Molecular Therapy - Methods & Clinical Development [2], nke gosipụtara atụmanya ngwa ngwa maka na vivo gene therapy nke ntị chiri eketa.Uri Manor, osote prọfesọ na-eme nchọpụta na Salk Institute na onye isi ụlọ ọrụ Waitt Center for Advanced Biophotonics, kwuru na a mụrụ ya nwere nnukwu ịnụ ihe na-eche na iweghachi anụ ahụ ga-abụ onyinye magburu onwe ya.Nnyocha ya gara aga chọpụtara na Eps8 bụ protein na-achịkwa actin nke nwere njikọ actin na capping;N'ime sel ntutu isi cochlear, mgbagwoju protein nke Eps8 na MYO15A, WHIRLIN, GPSM2 na GNAI3 dị na nke kachasị dị n'ime ọtụtụ ndụmọdụ nke ogologo stereocilia, nke ya na MYO15A na-eme ka BAIAP2L2 na njedebe nke stereocilia dị mkpụmkpụ, chọrọ maka nlekọta nke ntutu isi.Ya mere, Eps8 nwere ike ịhazi ogologo oge nke stereocilia nke mkpụrụ ndụ ntutu, nke dị mkpa maka ịrụ ọrụ ntị nkịtị;Mwepụ ma ọ bụ mmụgharị Eps8 ga-eduga na stereocilia dị mkpụmkpụ, nke na-eme ka ọ ghara inwe ike ịgbanwe ụda nke ọma ka ọ bụrụ akara eletrik maka nghọta ụbụrụ, nke na-eduga na ntị chiri..N'otu oge ahụ, onye na-emekọ ihe ọnụ Walter Marcotti, onye prọfesọ na Mahadum Sheffield, chọpụtara na mkpụrụ ndụ ntutu enweghị ike ịmalite nke ọma na enweghị Eps8.N'ime ọmụmụ ihe a, Manor na Marcotti jikọtara ọnụ iji nyochaa ma ịgbakwunye Eps8 na sel stereociliary nwere ike iweghachi ọrụ ha na, n'aka nke ya, meziwanye ịnụ ihe na ụmụ oke.Ndị otu nyocha ahụ jiri nje virus adeno (AAV) vector Anc80L65 wepụta usoro nzuzo nke nwere ụdị anụ ọhịa EPS8 n'ime cochlea nke Eps8-/- ụmụ oke P1-P2 amụrụ ọhụrụ site na ntụtụ mkpuchi windo gburugburu;na mouse cochlear sel ntutu isi arụziri ọrụ nke stereocilia tupu ha etoo;na mmetụta nrụzi ka e ji mara teknụzụ onyonyo na nha nke stereocilia.Nsonaazụ gosiri na Eps8 mụbara ogologo stereocilia ma weghachi ọrụ cell ntutu na sel ndị dị ala.Ha chọpụtakwara na ka oge na-aga, mkpụrụ ndụ ndị ahụ yiri ka ha enweghị ike ịnapụta ha site na ọgwụgwọ mkpụrụ ndụ ihe nketa a.Ihe ọ pụtara bụ na ọgwụgwọ a nwere ike ịdị mkpa ka a na-enye ya n'ime utero, n'ihi na mkpụrụ ndụ ntutu Eps8-/- nwere ike toro ma ọ bụ kwakọba mmebi na-enweghị mmezi mgbe a mụsịrị ụmụ oke."Eps8 bụ protein nwere ọtụtụ ọrụ dị iche iche, ma a ka nwere ọtụtụ ihe ịchọpụta," Manor kwuru.Nchọpụta ga-eme n'ọdịnihu ga-agụnye nyocha mmetụta ọgwụgwọ mkpụrụ ndụ Eps8 na iweghachi anụ ahụ na ọkwa mmepe dị iche iche, yana ma ọ ga-ekwe omume ịgbatị ohere ọgwụgwọ.N'otu aka ahụ, na Nọvemba 2020, Prọfesọ KarenB Avraham nke Mahadum Tel Aviv dị na Israel bipụtara nsonaazụ ya na akwụkwọ akụkọ EMBO Molecular Medicine [3], na-eji teknụzụ ọgwụgwọ mkpụrụ ndụ ọhụrụ mepụta nje na-emetụta adeno synthetic na-enweghị mmerụ ahụ AAV9-PHP.B, A na-edozi ntụpọ mkpụrụ ndụ na mkpụrụ ndụ ntutu isi nke Syne4-/- ụmụ oke site n'ịgbanye nje na-ebu usoro ntinye nke Syne4 n'ime ntị nke ụmụ oke, na-enye ya ohere ịbanye n'ime sel ntutu ma hapụ ihe mkpụrụ ndụ ihe nketa na-ebu, na-enye ha ohere ịmalite ma na-arụ ọrụ nke ọma (dị ka ọ dị na Fig 2).

Fig2.Ngosipụta nhazi nke ime ntị ime, na-elekwasị anya na akụkụ nke Corti na ọrụ cellular nke nesprin-4.

Enwere ike ịhụ na iji usoro ọgwụgwọ mkpụrụ ndụ ihe nketa iji nweta nzube nke ịgwọ ọrịa ndị e ketara eketa na ọkwa nke mkpụrụ ndụ ihe nketa site na ntinye, wepụ ma ọ bụ mezie mkpụrụ ndụ ihe nketa ọ bụla maka ọgwụgwọ (ya bụ, ịchịkwa mgbanwe mkpụrụ ndụ ihe nketa na ọrịa ahụ) nwere mmetụta dị elu nke ụlọ ọgwụ.atụmanya ngwa.Enwere ike ikewa usoro ọgwụgwọ mkpụrụ ndụ ihe nketa ugbu a maka ụkọ mkpụrụ ndụ ihe nketa n'ime ụdị ndị a:

nnọchi mkpụrụ ndụ ihe nketa

O doro anya na ndochi mkpụrụ ndụ ihe nketa bụ ụdị ọgwụgwọ mkpụrụ ndụ ihe nketa '' kwụ ọtọ', dabere na ịchọpụta na dochie mkpụrụ ndụ nwere nkwarụ jiri ụdị mkpụrụ ndụ nkịtị ma ọ bụ ụdị anụ ọhịa dochie ya.Ọmụmụ ọgwụgwọ mkpụrụ ndụ ihe nke ọma na-aga nke ọma n'ime ime maka ịnwụ anụ nke kpatara nhichapụ nke vesicular glutamate transporter 3 (VGLUT3);AAV1-mgbazite nnyefe nke exogenous VGLUT3 ngafe n'ime ntị ntutu isi (IHCs) nwere ike ime ka a na-anụghachi mgbake, mgbake akụkụ ribbon synaptic morphology, na nzaghachi convulsive [4].Otú ọ dị, na ihe atụ gụnyere abụọ AAV-nyefere gene nnọchi nke akọwara ná mmalite n'elu, ọ dị mkpa iburu n'obi na ụdị òké na-eji maka ụfọdụ ụdị nke mkpụrụ ndụ ihichapụ ihe nketa na-anụ ọnwụ ọnwụ bụ nwa oge dị iche na ụmụ mmadụ, na P1 ụmụ oke , ntị n'ime bụ na tozuru okè ogbo nke mmepe.N'ụzọ dị iche, a mụrụ ụmụ mmadụ na ntị tozuru okè n'ime.Ọdịiche a na-egbochi itinye nsonaazụ òké n'ọgwụgwọ ọgbaghara nke mmadụ ketara eketa, ọ gwụla ma ebugara usoro ọgwụgwọ mkpụrụ ndụ ihe nketa na ntị òké tozuru oke.

Edezi mkpụrụ ndụ: CRISPR/Cas9

E jiri ya tụnyere “mgbanwe mkpụrụ ndụ ihe nketa”, mmepe nke teknụzụ na-edezi mkpụrụ ndụ ihe nketa ewetala mmalite nke ịgwọ ọrịa mkpụrụ ndụ ihe nketa site na mgbọrọgwụ.N'ụzọ dị mkpa, usoro nhazi mkpụrụ ndụ ihe nketa na-eme ka mmejọ nke usoro ọgwụgwọ mkpụrụ ndụ ihe nketa na-adịghị mma nke na-adabaghị maka ọrịa ndị ntị chiri nke na-ebutekarị, yana nsogbu nke usoro ikwubiga ihe ókè anaghị adịte aka.Mgbe ndị na-eme nchọpụta China kụpụrụ kpọmkwem Myo6C442Y mutant allele na Myo6WT / C442Y ụmụ oke na-eji AAV-SaCas9-KKH-Myo6-g2 gene editing system, na n'ime ọnwa 5 nke knockout, ụmụ oke arụghachiri ọrụ auditory nke ihe nlereanya ahụ;N'otu oge ahụ, a chọpụtakwara na ọnụọgụ ndụ nke mkpụrụ ndụ ntutu dị na ntị dị n'ime na-eme ka ọ dịkwuo mma, ọdịdị nke cilia na-adịkwa mgbe niile, na-edozi ihe ngosi electrophysiological [5].Nke a bụ ọmụmụ ihe mbụ n'ụwa iji teknụzụ CRISPR/Cas9 maka ọgwụgwọ ntị chiri eketa nke Myo6 gene mutation kpatara, yana ọ bụ ọganihu dị mkpa nyocha nke teknụzụ na-edezi mkpụrụ ndụ ihe nketa maka ọgwụgwọ nti ntị nketa.Nsụgharị ọgwụgwọ ụlọ ọgwụ na-enye ntọala sayensị siri ike.

Ụzọ nnyefe usoro ọgwụgwọ mkpụrụ ndụ ihe nketa

Ka usoro ọgwụgwọ mkpụrụ ndụ ihe wee nwee ihe ịga nke ọma, mkpụrụ ndụ DNA gba ọtọ enweghị ike ịbanye n'ime sel nke ọma n'ihi hydrophilicity ha na ụgwọ ọjọọ nke otu phosphate, na iji hụ na iguzosi ike n'ezi ihe nke mkpụrụ ndụ nucleic acid agbakwunyere, a ga-ahọrọ usoro dị mma ma dị irè.A na-ebunye DNA agbakwunyere na cell ma ọ bụ anụ ahụ e lekwasịrị anya.A na-eji AAV eme ihe n'ọtụtụ ebe dị ka ụgbọ nnyefe maka ọgwụgwọ ọrịa n'ihi mmetụta ya dị elu na-efe efe, obere immunogenicity, na tropism sara mbara na ụdị anụ ahụ dị iche iche.Ka ọ dị ugbu a, nnukwu ọrụ nyocha ekpebiela tropism nke ụdị subtypes dị iche iche nke AAV metụtara ụdị sel dị iche iche na cochlea òké.Iji njirimara nnyefe AAV jikọtara ya na ndị na-akwalite cell-kpọmkwem nwere ike nweta okwu kpọmkwem cell, nke nwere ike ibelata mmetụta na-apụ apụ.Na mgbakwunye, dị ka ihe ọzọ na vectors AAV ọdịnala, a na-emepụta vectors AAV synthetic ọhụrụ mgbe niile ma gosipụta ikike ntụgharị dị elu na ntị ime, nke AAV2/Anc80L65 bụ nke a na-ejikarị eme ihe.Enwere ike kewaa ụzọ nnyefe na-abụghị nke nje na ụzọ anụ ahụ (microinjection na electroporation) na ụzọ kemịkal (nke dabeere na lipid, polymer-based, and gold nanoparticles).Ejila ụzọ abụọ a mee ihe n'ịgwọ ọrịa ntị chiri eketa ma gosipụta uru na njedebe dị iche iche.Na mgbakwunye na ụgbọ nnyefe maka ọgwụgwọ mkpụrụ ndụ ihe nketa dị ka ụgbọ ala, enwere ike iji ụzọ dị iche iche maka nchịkwa mkpụrụ ndụ vivo dabere na ụdị mkpụrụ ndụ ebumnuche dị iche iche, ụzọ nchịkwa, na ịdị irè ọgwụgwọ.Ọdịdị dị mgbagwoju anya nke ntị ime n'ime na-eme ka o sie ike iru sel ezubere iche na nkesa nke ndị na-edezi genome na-adị ngwa ngwa.Labyrinth membranous dị n'ime labyrinth ọkpụkpụ nke ọkpụkpụ anụ ahụ ma gụnye eriri cochlear, duct semicircular, utricle, na balloon.Mwepu ya dị iche iche, mgbasa ozi lymphatic pere mpe, na ikewapụ ya na ọbara site na mgbochi oke ọbara na-egbochi nnyefe usoro ọgwụgwọ dị mma naanị maka ụmụ oke ọhụrụ.Iji nweta titer viral dabara maka ọgwụgwọ mkpụrụ ndụ ihe nketa, ịgbanye vectors mpaghara ozugbo n'ime ntị dị mkpa.Ụzọ ịgba ntụtụ n'usoro gụnyere [6]: (1) gburugburu window akpụkpọ (RWM), (2) tracheostomy, (3) endolymphatic ma ọ bụ perilymphatic cochleostomy, (4) gburugburu window akpụkpọ gbakwunyere Tube feestration (CF) (dị ka Fig. 3).

Fig3.Ntinye ntị dị n'ime nke ọgwụgwọ mkpụrụ ndụ ihe nketa.

Ọ bụ ezie na e meela ọtụtụ ọganihu na usoro ọgwụgwọ mkpụrụ ndụ ihe nketa, dabere na ebumnuche ntụgharị ụlọ ọgwụ, a ga-arụkwu ọrụ tupu ọgwụgwọ mkpụrụ ndụ ihe nketa aghọọ nhọrọ ọgwụgwọ nke mbụ maka ndị ọrịa nwere ọrịa mkpụrụ ndụ ihe nketa, karịsịa na mmepe nke vector dị mma ma dị irè na usoro nnyefe.Mana anyị kwenyere na n'ọdịnihu dị nso, ụdị ọgwụgwọ ndị a ga-aghọ usoro ọgwụgwọ ahaziri onwe ya ma nwee mmetụta dị mma na ndụ ndị nwere ọrịa mkpụrụ ndụ ihe nketa na ezinụlọ ha.

Foregene ewepụtala ngwa nyocha dị elu maka mkpụrụ ndụ ihe nketa ezubere iche, nke na-adị ngwa ngwa ma nwee ike ịme ntụgharị ntụgharị na mmeghachi omume qPCR na-enweghị mmịpụta RNA.

Njikọ ngwaahịa

Ngwa Cell Direct RT-qPCR—Taqman/SYBR GREEN I

Maka ozi ngwaahịa ọzọ, biko kpọtụrụ:

overseas@foregene.com