Ndu

Ogologo RNA na-abụghị koodu, lncRNA bụ RNA na-enweghị koodu nwere ogologo karịa 200 nucleotides, n'ozuzu n'etiti 200-100000 nt.lncRNA na-achịkwa okwu mkpụrụ ndụ ihe nketa na epigenetic, transcription na post-transcriptional ọkwa, na-ekere òkè na X chromosome silencing, genome imprinting na chromatin mgbanwe, transcription activation, transcription nnyonye anya, nuclear njem, cell okirikiri ụkpụrụ, cell iche ụkpụrụ, na cell iche iche ụkpụrụ, na doses nkwụghachi mmetụta (usoro nkwụghachi ụgwọ ndị ọzọ metụtara mmepe nke usoro ọgwụgwọ, na ọtụtụ usoro ọgwụgwọ metụtara mmega ahụ). ma ugbu a bụ otu n'ime ebe na-ekpo ọkụ n'ọhịa nke biomedicine.

01  Ụdị na njirimara nke LncRNA

A na-ekewa lncRNA n'ụdị dị iche iche dịka isi mmalite dị iche iche siri dị, dịka egosiri na foto dị n'elu.Nwere njirimara ndị a:

1. lncRNA na-abụkarị ogologo oge, na okwu ike na ụzọ dị iche iche splicing n'oge dị iche iche
2. Tụnyere mkpụrụ ndụ ihe nketa koodu, lncRNA na-enwekarị ọkwa nkwupụta dị ala
3. Ọtụtụ lncRNA nwere nkọwapụta nke nwa oge na nke gbasara ohere n'ime usoro nhazi anụ ahụ na mmepe.
4. Enwere okwu njirimara na etuto na ọrịa ndị ọzọ
5. Ebe subcellular nke lncRNA dị iche iche
6. Usoro dị ala na nchekwa, ma ọrụ ahụ nwere ogo nke nchekwa, wdg.

02 Ajụjụ ndị a na-ajụkarị gbasara ntụgharị ntụgharị LncRNA

N'ihi obere ọdịnaya nke lncRNA na sel, ogologo ogologo na nhazi ọkwa dị elu, RNA dị otú ahụ na-enwekarị usoro mgbagwoju anya dị ka loops ma ọ bụ ntutu isi, na RT-qPCR na-enwekarị nsogbu nke ntụgharị ntụgharị ma ọ bụ arụmọrụ dị ala.

03 Ihe ngwọta ntụgharị ntụgharị LncRNA

N'ime iwu etiti, usoro nje RNA na-eji transcriptase reverse nke ha mepụta DNA site na iji RNA dị ka ndebiri ka a na-akpọ ntụgharị ntụgharị.Usoro iji nje virus RNA reverse transcriptase iji mepụta template cDNA in vitro ka a na-akpọ reverse transcription.Ihe ndị bụ isi gụnyere na sistemụ ntụgharị ntụgharị: template RNA, reverse transcriptase, primers na ihe ndị ọzọ.

1.RNA ndebiri

Mmetụta nke ndebiri RNA na ntụgharị ntụgharị na-egosipụta na nhazi ya, ịdị ọcha na iguzosi ike n'ezi ihe.Ka ịdị ọcha na iguzosi ike n'ezi ihe nke RNA ewepụtara dị elu, ka arụmọrụ ntụgharị ntụgharị na-abawanye na nsonaazụ ọnụọgụ na-esote.RNA dị ọcha site na reagents mmịpụta RNA a na-ejikarị na-enwekarị ihe mfọdu nke mmanya na guanidine nnu, nke nwere mmetụta mgbochi siri ike na ọtụtụ ntụgharị ntụgharị.

2.Reverse transcriptase

Reverse transcriptase nwere mmetụta dị mkpa na sistemụ ntụgharị ntụgharị niile.Okpomọkụ kwesịrị ekwesị maka reverse transcriptase eji n'ọtụtụ ụlọ nyocha na-abụkarị 42 Celsius.N'ezie, mmeghe nke usoro RNA dị elu chọrọ okpomọkụ dị elu, na ihe ndị a chọrọ maka ntụgharị transcriptase dị elu.

3.Ihe mbụ

Ntụgharị ntụgharị ntụgharị na-agụnye primers kpọmkwem mkpụrụ ndụ ihe nketa, primers random na Oligo dT primers.Ọtụtụ lncRNA enweghị ọdụ polyA, yana ọ dị mkpa ijikọ nke ọma primers na Oligo dT.

4.Ihe ndị ọzọ

N'iburu n'uche na RNA dị mfe karịa iweda ya, enwere ike ibelata mmeghe nke akụrụngwa na sistemụ ntụgharị ntụgharị, nke nwere ike igbochi ntinye RNase nke ọma ma hụ na ọ na-aga nke ọma nke ntụgharị ntụgharị.

Foregenena-enweta site na ndebiri RNA, tụgharịa ntụgharị gaa na qPCR

Zụgharịa nchọpụta lncRNA gị nke ọma

Ngụkọta anụmanụ RNA Iịnọrọ onwe yaNgwa (ya na kọlụm mwepụ gDNA)

Ọnụ ọgụgụ cell RNA Iịnọrọ onwe yaNgwa (ya na kọlụm mwepụ gDNA)

Lnc-RT HeroTM I (ya na gDNase) (Super Premix maka njikọ cDNA nke mbụ sitere na lncRNA)

Ezigbo oge PCR EasyTM-SYBR Green I

Auru ofMwepụta RNA:

Ngwa ahụ na-eji teknụzụ mmịpụta RNA ọgbọ nke atọ, ọ nweghị mkpa iji DNAse.

Nkeji 11 sitere na 96, 24, 12, na 6-nke ọma efere sel zụlitere nke ọma, mmịpụta dị elu nke gDNA na-enweghị, ịdị ọcha dị elu, mkpokọta cell RNA dị elu.

Uru nke ntụgharị ntụgharị lncRNA:

Sistemụ ntụgharị ntụgharị ewepụtara nke ọma maka LncRNA iji wepụ mmetọ DNA genomic ngwa ngwa.

Usoro ntụgharị ntụgharị nwere nkwụsi ike dị elu ma ka na-arụ ọrụ ntụgharị ntụgharị dị mma na 50°C.

Ụdị nwere ọdịnaya GC dị elu yana usoro nke abụọ dị mgbagwoju anya nwere ike iji arụ ọrụ dị elu tụgharịa.

Uruof qPCR:

Mmalite na-ekpo ọkụ Foregene Taq Polymerase nwere arụmọrụ nkwalite dị elu, mmetụta mmụba dị elu, yana nkọwa nkwalite dị elu.

Ngwakọta ezigbo PCR dị mfe na-eme SYBR Green M nwere nghọta nchọpụta dị elu, yana ike ọkụ ya bụ ugboro 3-5 nke ngwaahịa ndị yiri ya, nke nwere ike gboo mkpa ụdị nnwale dị iche iche nke fluorescence.