PCR igwe|Ị ghọtara n'ezie?

Teknụzụ PCR na-emeri Nobel Prize

N'afọ 1993, ọkà mmụta sayensị America bụ Mulis nwetara Nrite Nobel na Chemistry, ihe ọ rụzuru bụ imepụta teknụzụ PCR.Anwansi nke teknụzụ PCR dị na njirimara ndị a: Nke mbụ, ọnụọgụ DNA nke a ga-amụba dị ntakịrị, ma n'ụzọ doro anya, enwere ike iji otu molecule mee ihe maka mmụba;Nke abuo, nkwuputa arụmọrụ dị elu, na ọnụ ọgụgụ nke mkpụrụ ndụ ihe nketa a na-achọsi ike bụ nke ukwuu.Amplification, ihe karịrị 10 nde ugboro n'ime awa ole na ole.Ugbu a ejirila ngwa PCR mee ihe na nyocha sayensị ndụ na ọtụtụ akụkụ ndị ọzọ.

Ụdị dị iche iche na ndị na-emepụta cyclers okpomọkụ nwere ike igosi arụmọrụ dị iche iche na nkwughachi.Esemokwu ndị a na-emetụta ọ bụghị naanị PCR arụmọrụ kamakwa izi ezi na nkwekọ nke data enwetara.Ịghọta atụmatụ igwe PCR nwere ike inyere anyị aka ịbawanye ọganihu nke nnwale anyị.

Igwe ọkụ ọkụ

Izi ezi nke okpomọkụ nke cycler thermal nwere ike ikpebi maka ihe ịga nke ọma ma ọ bụ ọdịda nke PCR.Nkwekọrịta okpomọkụ nke ọma na nke ọma na ngọngọ kpo oku dịkwa oke mkpa iji nweta nsonaazụ PCR nke a pụrụ ịdabere na ya na nke a pụrụ imepụtaghachi.

Otu ụzọ ị ga-esi hụ na izi ezi okpomọkụ bụ ịnwale ugboro ugboro site na iji ngwa nyocha ọnọdụ okpomọkụ wee mezie ka ọ dị onye ọkachamara zụrụ azụ chọrọ.A na-ejikarị nyocha nyocha okpomọkụ mee ihe:

Izi ezi na-aga nke ọma dabere na ịtọọ okpomọkụ na ọnọdụ isothermal

Izi ezi nke ọma ruo n'olulu mmiri dabere na ịtọọ okpomọkụ ka mgbanwe okpomọkụ gasịrị

Okpomọkụ mkpuchi nke ziri ezi

Njikwa okpomoku na-ekpo ọkụ nke mbụ

Njikwa okpomọkụ gradient bụ ọrụ nke ngwa PCR nke na-eme ka njikarịcha nchacha primer na PCR.Ebumnuche nke ntọala gradient bụ iji nweta okpomọkụ dị iche iche n'etiti modul, na site na ≥2 Celsius C na-ebili ma daa n'etiti kọlụm ọ bụla, enwere ike ịnwale okpomọkụ dị iche iche n'otu oge iji nweta okpomọkụ kachasị mma nke primer annealing.N'usoro iwu, ezi gradient na-enweta okpomọkụ ahịrị n'etiti modul.

Agbanyeghị, ndị na-ahụ maka igwe ọkụ gradient a na-ahụkarị na-eji otu mgbochi ọkụ na njikwa okpomọkụ site na ihe ọkụ abụọ na ihe jụrụ oyi dị na nsọtụ abụọ ahụ, na-ebutekarị oke ndị a:

Naanị okpomoku abụọ ka enwere ike ịtọ: nnukwu okpomọkụ na nke dị ala maka annealing primer ka edobere na nsọtụ abụọ nke modul thermal, na enweghị ike nweta ọnọdụ ọnọdụ okpomọkụ ndị ọzọ n'etiti modul.

N'ihi mgbanwe okpomọkụ dị n'etiti ogidi dị iche iche, okpomọkụ dị n'etiti mpaghara dị iche iche na modul nwere ike ịgbaso usoro sigmoidal kama ịbụ ezi gradient linear.

Okpomọkụ nlele

Ikike nke cycler thermal iji chịkwaa okpomọkụ nlele dị ezigbo mkpa maka izi ezi nke nsonaazụ PCR.Ngwa-ngwa-ngwa dị ka ọnụego rampụ, oge njide, na algọridim dị oke mkpa maka ịkọ okpomọkụ nlele.

Ọnụego kpo oku na oyi nke igwe PCR pụtara na okpomọkụ na-agbanwe n'etiti usoro PCR nke na-eme n'ime oge ụfọdụ.Ebe ọ bụ na ọ na-ewe oge ụfọdụ maka ikpo ọkụ na-ebufe site na modul gaa na ihe nlele ahụ, ezigbo ọkụ ọkụ na oyi na-ekpo ọkụ nke ihe nlele ahụ ga-adị nwayọọ.Ya mere, nkọwa nke ọsọ mgbanwe okpomọkụ dị mkpa ka a mata ọdịiche na nghọta.

Ọnụego mgbago modul kachasị ma ọ bụ ọnụ ọgụgụ kacha elu na-anọchi anya mgbanwe okpomọkụ kachasị ngwa ngwa nke modul nwere ike nweta n'ime obere oge n'oge rampụ ahụ.

Ọnụego mgbochi mgbochi na-anọchi anya ọnụego mgbanwe okpomọkụ n'ime ogologo oge ma ga-enye ihe nleba anya karịa ọsọ igwe PCR.

Ọnụ ọgụgụ kachasị elu nke ikpo ọkụ na oyi na-atụ na nkezi ihe nlele na-ekpo ọkụ na-egosipụta ezigbo okpomọkụ nke ihe nlele ahụ nwetara.Ọnụego nlele nke kpo oku na oyi ga-enye ntụnyere ziri ezi karịa arụmọrụ nke igwe PCR yana mmetụta ọ nwere na nsonaazụ PCR.

Mgbe ị na-eme nnọchi cycler, a na-atụ aro ka iji ngwa nwere mmemme ọnụego ramp nke na-egosipụta ọnọdụ gara aga maka ngbanwe dị mfe yana mmetụta pere mpe na PCR repeatability.

Ekwesịrị ịhazi cycler thermal ka ọ bụrụ usoro oge naanị mgbe ihe nlele ahụ rutere n'okpomọkụ setịpụrụ.N'ụzọ dị otú a, oge a na-edobe ihe nlele ahụ na ọnọdụ okpomọkụ a na-edozi ga-edozi nke ọma na ọnọdụ okirikiri kwekọrọ na ya chọrọ na usoro ọrụ.

Ndị na-anya igwe na-ekpo ọkụ na-ejikarị algọridim mgbakọ na mwepụ gbagwojuru anya iji hụ na ihe nlele nwere ike rute ọnọdụ okpomọkụ ngwa ngwa dịka mmemme atọrọ.Dabere na olu nke usoro mmeghachi omume na ọkpụrụkpụ nke PCR plastik ejiri mee ihe, algọridim nwere ike ịkọ ọnọdụ okpomọkụ nke ihe nlele ahụ na oge ọ ga-ewe iji rute ọnọdụ okpomọkụ.N'ịdabere na algọridim ndị a, n'oge usoro ikpo ọkụ ma ọ bụ dị jụụ nke cycler thermal, nkwụsị okpomọkụ ga-adịkarị karịa uru a kwadoro site na usoro a na-akpọ thermal block overshoot ma ọ bụ undershoot.Ntọlite ​​​​dị otu a na-eme ka nlele ahụ rute ọnọdụ okpomọkụ nke edobere ngwa ngwa o kwere mee na-enweghị oke ma ọ bụ mebie onwe ya.

Ntinye nnwale

Ihe ndị nwere ike ịbawanye ntinye nke igwe na-ekpo ọkụ ọkụ gụnyere ọnụego rampụ, nhazi ngọngọ okpomọkụ, na ntinye nke nyiwe akpaaka.

Ọnụ ọkụ ọkụ na oyi na-ekpo ọkụ nke thermal cycler na-anọchite anya ọsọ ọ na-erute ọnọdụ okpomọkụ.Ngwa ngwa okpomọkụ na-ebili ma daa, ngwa ngwa PCR ga-agba ọsọ, nke pụtara na enwere ike ịmechaa nyocha ndị ọzọ n'ime oge enyere.Tụkwasị na nke a, enwere ike ime ngwa ngwa site na iji DNA polymerases ngwa ngwa.

Nhazi nke modul cycler thermal dịkwa oke mkpa maka nnwale PCR.Dịka ọmụmaatụ, modul nwere ike dochie anya na-enye ohere mgbanwe na ọnụ ọgụgụ nke nlele kwa ọsọ.Na mgbakwunye, modul kpo oku nwere modul a na-achịkwa n'otu n'otu dị mma maka ịme mmemme PCR dị iche iche n'otu oge n'otu igwe ọkụ ọkụ.

Maka PCR dị elu na-akpaghị aka, ngwanro nke na-achịkwa usoro njikwa ọkpọkọ kwesịrị ịbụ mmemme ma kwekọọ.Sistemụ akpaaka dị mma maka ịme mmeghachi omume PCR dị elu n'ihi na enwere ike ịgba ọsọ na-aga n'ihu na obere ntinye aka mmadụ, si otú a na-ebelata oge achọrọ maka nhazi nnwale ntuziaka na ịbawanye ọnụ ọgụgụ mmeghachi omume na oge enyere.

Ntụkwasị obi, ịdịte aka na mma nke ndị igwe igwe ọkụ

Na mgbakwunye na arụmọrụ na ikike mmepụta ihe, igwe PCR kwesịkwara inwe ike iguzogide ụfọdụ ojiji ugboro ugboro, nrụgide gburugburu ebe obibi, na ọnọdụ mbupu.Ụfọdụ ndị na-emepụta ihe nwere ike ịkọ maka otu ngwá ọrụ ahụ si arụ ọrụ nyocha nke ntụkwasị obi na ịdịte aka.Nchọpụta ngwa PCR kwekọrọ gụnyere:

Ntụkwasị obi: A na-eji igwe igwe eme nnwale ugboro ugboro na akụrụngwa akụrụngwa a na-ejikarị dị ka mkpuchi ọkụ, ogwe njikwa / ihuenyo mmetụ, na modul ịgba ígwè okpomọkụ.

Nrụgide gburugburu: Enwere ike iji ọnụ ụlọ gburugburu mee ka ọnọdụ dị iche iche nke nnwale oge niile, dị ka okpomọkụ, iru mmiri.

Nnwale Mbupu: Enwere ike ịme ujo siri ike na nnwale ịma jijiji dị ka ụkpụrụ International Safety Shipping Association si dị, iji hụ na ngwa ahụ nwere ike bịarute n'ọnọdụ ọrụ adịghị emebi emebi.

Akwụkwọ ikike na ọrụ maka idokwa igwe PCR

N'agbanyeghị ntụkwasị obi siri ike na nnwale ogologo oge, ndị na-anya igwe na-ekpo ọkụ ga-enwe nsogbu teknụzụ na ndụ nke ngwa.Maka udo nke uche, ekwesịrị ịtụle akwụkwọ ikike, ọrụ, na mmezi nke onye nrụpụta mgbe ị na-azụrụ ngwa.

Mgbanwe nke ọrụ dị ka ọrụ na-arụ ọrụ na saịtị / nlọghachi na ụlọ mmepụta ihe, ọrụ nlekota oru nlekota oru, na ihe ngbanwe na usoro nhazi, wdg, iji belata mmetụta na arụmọrụ ọrụ.

Ogologo oge akwụkwọ ikike, oge ntụgharị nke ọrụ ahụ, ịnweta nkwado teknụzụ, yana nkà nke ndị ọrụ nkwado ọkachamara.

Enwere ike itinye ngwa, ịrụ ọrụ, imekọ ihe ọnụ, na nkwenye iji zute ụlọ nyocha na usoro iwu metụtara ya.Ọrụ nlekọta dị ka nkwenye okpomọkụ, nnwale, na nhazigharị dị iji hụ na ngwá ọrụ ahụ na-arụ ọrụ nke ọma yana ihe ndị kwekọrọ.

Ngwaahịa ndị emetụtara: