N'oge na-adịbeghị anya, achọpụtara m ihe dị ịtụnanya!Ọtụtụ ndị ọkachamara nnwale dị elu gbara ya gburugburu amaghịdị isi ihe ọmụma nnwale nnwale.

Dịka ọmụmaatụ, ị nwere ike ịza ajụjụ ndị a?

Enwere ọdịiche dị n'etiti OD260 na A260?Kedu ihe nke ọ bụla pụtara?
OD bụ abbreviation nke ngwa anya njupụta (optical density), A bụ abbreviation nke absorbance (absorbance), echiche abụọ bụ n'ezie otu, "optical density" bụ "absorbance", ma "optical njupụta" kwekọrọ na ọtụtụ mba ụkpụrụ na ndị ọzọ ọkọlọtọ.

Anyị na-atụkarị uru OD na 260nm iji gbakọọ mkpokọta acid nucleic, yabụ kedu ihe 1OD na-anọchi anya ya?
Nucleic acid nwere oke mmịpụta kacha na ogologo nm nke 260nm, nke nwere ma DNA na RNA, yana iberibe nucleic acid gbajiri agbaji (nke a bụ isi ihe).
Edekọbara uru OD nke a tụrụ na ogologo wavelength nke 260 nm ka OD260.Ọ bụrụ na nlele ahụ dị ọcha, uru OD260 nwere ike gbakọọ ntinye nke ihe nlele nucleic acid.
1 OD260 = 50 μg/ml dsDNA (DNA nwere eriri abụọ)
=37 μg/ml ssDNA (DNA nwere otu eriri)
= 40 μg/ml RNA
=30 μg/ml dNTPs (oligonucleotides)
Enwere njikọ na ọdịiche dị n'etiti RT-PCR, Realtime-PCR na QPCR?
RT-PCR dị mkpụmkpụ maka PCR ntụgharị ntụgharị
Ezigbo oge PCR = qPCR, dị mkpụmkpụ maka PCR Real Time Quantitative
Ọ bụ ezie na Real Time PCR (ezigbo fluorescent quantitative PCR) na Reverse Transcription PCR (reverse transcription PCR) ha abụọ yiri ka a ga-akpọbiri ya RT-PCR.Mana nkwekọrịta mba ụwa bụ: RT-PCR na-ezo aka na PCR ntụgharị ntụgharị.

Kedu ihe a na-ejikarị nt, bp, na kb kọwaa ogologo DNA/RNA na bayoloji?
nt = nucleotide
bp = isi ụzọ abụọ isi
kb = kilobase

N'ezie, ị ga-asị na ọtụtụ ndị anaghị eche banyere obere nkọwa ndị a!Onye ọ bụla na-eme nke a, ọ dịghịkwa onye ga-ajụ gị ihe ọ bụ.Ị maara na nke a adịghị mkpa, nri?

Mba, Mba, Mba, ọ dị ezigbo mkpa ịmara nke a!n'ihi gịnị?
N'ihi na ị chọrọ biputere akụkọ!Nwanne!Ma ị na-achọ ngụsị akwụkwọ ma ọ bụ na-agbaso mmezu nyocha sayensị, ị ga-adabere na isiokwu ị ga-ekwu!

Mwepụta nucleic acid kwesịrị ịbụ nnwale kachasị mfe na nke kachasị.Ogo mmịpụta nucleic acid na-ekpebi nsonaazụ nnwale ndị na-esote.

Ọ bụ ezie na m na-ekwu ya ọtụtụ ugboro, a ka nwere ọtụtụ ndị enyi na-echeghị echiche.Oge a, ekpebiri m ịpụ n'akụkọ ahụ!

Ozi kacha nta maka mbipụta nke nnwale PCR nke Quantitative Real-Time, nke akpọrọ MIQE, bụ usoro ntuziaka nnwale fluorescence quantitative ewepụtara na mba ụwa, nke na-atụpụta ụkpụrụ kacha nta maka ozi nnwale dị mkpa maka ịlele nnwale fluorescence quantitative PCR na ibipụta akụkọ.Site na ọnọdụ nnwale na ụzọ nyocha nke onye nyocha na-enye, ndị nyocha nwere ike nyochaa nke ọma nke ọma atụmatụ nnwale nke onye nyocha.

Enwere ike ịhụ na n'akụkụ nke mmịpụta nucleic acid, a tụrụ aro ihe nchọpụta ndị a.

“E” na-egosi ozi a ga-enyerịrị yana “D” na-egosi ozi ekwesịrị ịnye ma ọ bụrụ na ọ dị mkpa.

Ụdị ahụ dị mgbagwoju anya, n'eziokwu, achọrọ m ịsị na onye ọ bụla kwesịrị ịmalite

ịdị ọcha (D), mkpụrụ (D), iguzosi ike n'ezi ihe (E) na nkwụsi ike (E) iji nyochaa acids Nucleic n'akụkụ anọ ndị a.

Dabere na omume nnwale, buru ụzọ kwuo banyere ụzọ nyocha nke ịdị ọcha na itinye uche.

Ntụle OD bụ usoro nchọpụta kachasị amasị yana kachasị mfe maka ndị nyocha.Banyere ụkpụrụ, agaghị m abanye nkọwa ebe a.Ọtụtụ ụlọ nyocha ugbu a na-eji ultra-micro spectrophotometers iji nyochaa n'ụzọ dị iche iche n'ụdị nucleic acid.Mgbe ị na-egosipụta uru nnabata, mmemme ahụ na-enye uru itinye uche ozugbo (nucleic acid, protein na fluorescent dye) na oke ndị metụtara ya.Maka nyocha nke uru OD, Chekwaa foto a ma ị ga-adị mma.

Ndepụta uru OD zuru ụwa ọnụ

Agbanyeghị, enwere oghere ole na ole achọrọ ka ewepụtara gị iche iche.

(E kwuwerị, amaara m na ị ga-abụrịrị ndị na-echekwa ma chere ruo mgbe ịchọrọ ha!)

Rịba ama 1 Akụrụngwa

Ngwá ọrụ dị iche iche ga-emetụta uru OD.Ọ bụrụhaala na OD260 nọ n'ime oke ụfọdụ, ụkpụrụ nke OD230 na OD280 bara uru.Dịka ọmụmaatụ, ụdị nnabata nke Eppendorf D30 nkịtị na 260nm bụ 0 ~ 3A, na NanoDrop Otu nke Thermo dị na 260nm.The absorbance nso nke 0.5 ~ 62.5A.

Rịba ama 2Dilution reagent

Enwere ike imetụta uru OD site na dilution nke reagents dị iche iche.Dịka ọmụmaatụ, ọgụgụ OD260/280 nke RNA dị ọcha na pH7.5 10mm Trisihe nchekwa dị n'etiti 1.9-2.1, mgbe ị nọna-anọpụ iche aqueous ngwọtaoke ga-adị ala, ikekwe naanị 1.8-2.0, mana nke a apụtaghị na ogo RNA na-agbanwe Ọdịiche.

Rịba ama 3Ihe ndị fọdụrụnụ

Ịdị adị nke ihe ndị fọdụrụnụ ga-emetụta izi ezi nke nha nha nucleic acid, yabụ ọ dị mkpa iji zere protein, phenol, polysaccharide na polyphenol residus n'ụdị nucleic acid dị ka o kwere mee.

Otú ọ dị, n'ezie, mmịpụta na organic reagents bụ usoro ochie.Na ngwa azụmahịa, enwere ike nweta mmetụta mmịpụta site na kọlụm adsorption dabeere na silica jikọtara ya na centrifugation, na-ezere reagents organic na-egbu egbu na ndị na-emerụ ahụ nke siri ike iwepụ, wdg.Ngwa mmịpụta nucleic acid nke Foregene, anaghị eji DNase/RNase na reagents organic na-egbu egbu n'oge ọrụ niile, ngwa ngwa yana nchekwa., na nkemmetụta bụnke ọma(na mberede kwuru na ọ bụ isi nkwọcha, mana amaara m na ị chọrọ ịma).

Ọmụmaatụ 1: mkpụrụ nke mmịpụta DNA nke mkpụrụ ndụ ihe nketa na ịdị ọcha

Foregene Soil DNA Isolation Kit (DE-05511) na-emeso nlele ala sitere na ebe dị iche iche, ego na ịdị ọcha nke DNA genomic enwetara ka egosiri na tebụl na-esonụ:
Ọmụmatụ 2: Mwepụta RNA anụ ahụ na ịdị ọcha

Anụmanụ Total RNA Isolation Kit (RE-03012) na-ahazi ụdị anụ ahụ dị iche iche, yana ego na ịdị ọcha nke RNA enwetara ka egosiri na tebụl dị n'okpuru (maka anụ ahụ òké):
Agbanyeghị, echela na ejiri uru OD mechaa gị.Ị nwere ihe ọ bụla na-elekọta isi ihe m dọtara gị n'ihu?

Mara

A ga-agbakọkwa molekul acid nucleic gbajiri agbaji na ntinye.Na-eche na ị nwere ihe fọdụrụ DNA nke genomic na RNA, uru OD gị ga-adị ka ọ dị oke elu, mana enweghị ike ikpebi mkpokọta RNA n'ezie.Ma RNA gị abụghị ihe edoghị anya ma enwere mmebi, yabụ anyị ka chọrọ usoro nyocha zuru oke iji nye mkpebi ziri ezi karịa, ya bụ, nleba anya n'ezi ihe nucleic acid akpọrọ na MIQE.