Banyere mmịpụta RNA

Afọ iri atọ gara aga, maka mmịpụta RNA, ihe anyị nwere ike iche bụ naanị otu esi enweta RNA zuru oke, agbanyeghị, ọ nweghị ihe achọrọ maka ọsọ mmịpụta (Ọgbọ mbụ Techology usoro Trizol mụrụ).Site na mmelite ugboro ugboro nke teknụzụ mmịpụta RNA, ihe anyị nwere ike ime abụghị naanị inweta nsonaazụ.Mgbe chere ihu na mmịpụta nke mbụ-emana Trizol dabeere reagents, experimenters n'ozuzu nsogbu ya cumbersome ọrụ nzọụkwụ;ọ bụ ezie na mgbe ọtụtụ njikarịcha na ihe ọhụrụ, ọ ka na-ewe oge dị ukwuu.N'otu oge ahụ, ekwesịrị iji reagents organic dị ka phenol na chloroform na usoro mmịpụta, nke na-eyikwa nchekwa nke ndị ọrụ dị mkpa egwu ruo n'ókè ụfọdụ.

Ọ dị mma, adaba na nchekwa

Ịchọta ngwaahịa mmịpụta RNA dị mma, dịkwa mma ma dị mma abụrụla ihe mgbaru ọsọ mbụ nke ndị nyocha.Ya mere, usoro mgbasa ozi Silica Spin Column maka mmịpụta RNA malitere.Ngwaahịa RNA nke ọgbọ nke atọ nke Foregene na-adọta uru nke ngwaahịa mmepụta kọlụm nke ọgbọ gara aga, na-eji (DNA-Cleaning + RNA only) teknụzụ Spin Column abụọ iji wepụ gDNA na irighiri anụ ahụ n'otu oge, na-enweghị ọgwụgwọ DNase nke gDNA fọdụrụnụ, na anaghịzi eji phenol, wdg. Nsi na-emerụ ahụ, na-emepụta oge dị mma, dị ka ihe ize ndụ dị ala, dị ka RNA dị ala.

chaatị ntụnyere usoro ọrụ

chaatị ntụnyere nsonaazụ nnwale

Foregene mkpokọta RNA kewapụ ihe nwere mkpụrụ mmịpụta RNA dị elu, ịdị ọcha dị mma, yana nsonaazụ mmịpụta nke miRNA dị mma karịa ngwa ika ndị ọzọ.

Electrophoresis nke 50 mg nke imeju oke RNA na-ewepụta site na ụzọ dị iche iche
Ọgbọ nke mbụ (1: Trizol)
Ọgbọ nke abụọ (2: ngwa mmịpụta RNA sitere na ụlọ ọrụ A)
Ọgbọ nke atọ (3: ngwa mmịpụta RNA gbakwunyere na ụlọ ọrụ A, 4: Foregene: RNA Isolation kits)

Eserese qPCR (esemokwu nkwuwa okwu)

A ghaghị iwepụ DNA nke genomic nke ọma n'oge mmịpụta RNA, ma ọ bụghị ya, ọ ga-enwe mmetụta a na-achịkwaghị achịkwa na nnwale ndị dị n'okpuru (uru CT mbụ, ihe ndị na-ezighị ezi).Ngwa ọgbọ na-abịa nke Foregene nwere ike wepu DNA genomic n'ụzọ zuru oke na-enweghị mgbakwunye nke DNA, na-echekwa oge dị ukwuu, na-ezere nbibi sitere na mmetọ RNase dịpụrụ adịpụ.
Ọgbọ mbụ (akwụkwọ ndụ akwụkwọ ndụ na-egosi TRlzol-, uhie na-egosi TRlzol +)

Ọgbọ nke abụọ (Blue na-egosi ụlọ ọrụ A RNA ngwa mmịpụta -, ọbara ọbara na-egosi ngwa ọrụ mmịpụta RNA Company +)

Ọgbọ nke atọ (acha anụnụ anụnụ na-egosi ụlọ ọrụ A RNA mmịpụta kit gbakwunyere, akwụkwọ ndụ akwụkwọ ndụ na-egosi ngwa iche nke Foregene RNA)

(Rịba ama: "_" na eserese qPCR na-egosi na e tinyebeghị DNA, na ewepụghị nje nke DNA; "+" na-egosi na agbakwunyere DNA, na e wepụwo mmetọ nke DNA)

Mezue mmịpụta RNA n'ime nkeji iri na otu

Ọ dịghị mkpa maka ọtụtụ afọ nke nucleic acid mmịpụta ahụmahụ mkpokọta, Foregene elu-arụmọrụ ngụkọta RNA kewapụ ngwa usoro ngwaahịa nwere ike inye gị ohere inweta elu-mkpụrụ na-adị ọcha RNA n'ime 11 nkeji iji gboo dị iche iche nnwale nnwale.

Ruo ugbu a, ọnụ ọgụgụ dị ukwuu nke ndị ahịa achọpụtala ngwaahịa Foregene mkpokọta RNA isolaton kits ma nye aka n'ọtụtụ akwụkwọ nwere nnukwu akara.N'ezie ojiji onye ahịa jiri eserese electrophoresis nzaghachi yana ọnụọgụ PCR njupụta mgbe ntụgharị ntụgharị na-egosi na RNA ewepụtara site na iji ngwaahịa Foregene abụghị naanị nnukwu itinye uche, kamakwa ọ na-eguzosi ike n'ezi ihe.Naanị teknụzụ ngwaahịa nke ahịa nwalere nwere ike ịkwado onye ọ bụla.

Ngwakọta mkpokọta cell RNA iche

Mkpụrụ RNA dị elu

Ngwa ngwa: Mechaa mwepu RNA n'ime nkeji iri na otu

Nchekwa: Ọnweghị kemịkalụ Organic etinyere

Ụfọdụ ngụ ndị nwere nnukwu akara:

1. Yuan Fang, Zezhong Liu, Yang Qiu, et al.Mgbochi nke viral suppressor nke protein RNAi site na peptides mmebe na-echebe site na ọrịa enteroviral na vivo, Immunity, 54(10), 2021: 2231-2244.e6.(Ọ bụrụ: 31.745,Ngwa nkewapụ RNA ViralNwamba No.RE-02011)

https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1074761321003617

2. Ren, Y., Wang, A., Wu, D. et al.Mgbochi abụọ nke mgbochi ebumpụta ụwa na apoptosis site na protein cytomegalovirus mmadụ UL37x1 na-enyere mmụgharị nje virus dị mma.Nat Microbiol 7, 1041-1053 (2022).(Ọ BỤRỤ: 30.964,Ngwakọta mkpokọta cell RNA icheNwamba No.RE-03111)

https://doi.org/10.1038/s41564-022-01136-6